B27无血清培养基的使用展现了一种重要的培养方法：允许细胞培养

在一套限定条件下进行，尽可能避免受到干扰参数的影响。

 

细胞适应B27无血清培养基的方法

1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到B27无血清培养基中。

一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应B27无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时，细胞*适应了无血清培养基。每隔3~5天，当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

2.连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到B27无血清培养基中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。

（1）以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到80%有血清培养基：30％sfm混合培养基中，传代培养。

（2）当细胞密度>5×105细胞/ml时，以2×105到3×105细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：sfm为50∶50的混合培养基中传代培养。

（3）以2×106到3×106细胞/ml细胞密度，25％有血清培养基和75%sfm中传代培养。

（4）当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml（接种后4到6天），在100％sfm培养基中传代培养。

（5）每隔3到5天，当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了B27无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。