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MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
试剂盒组成 | 500T |
MTT溶液 | 5ml |
DMSO | 60ml |
MTT检测试剂盒采用MTT经典的方法。其实老师可能自己配制,而买现成的,主要是图个省事。
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下,可以被*溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。
使用说明:
1. MTT溶液拿出解冻。DMSO常温存放,如果室温过低(DMSO在20度以下会结冰),可放37度预热解冻。
2. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要,进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。
3. 每孔加入10微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育4小时。
4. 每孔加入100微升DMSO,在细胞培养箱内再继续孵育。直至全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会长一些。
5. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片,可以使用560-600nm的滤光片。
有些实验室条件不足,没有酶标仪,听说用分光光度计来测,理论上没什么不可以。但肯定得是用微孔比色皿,速度快一点。
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