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更新时间：2024-01-07 | 阅读：2596
详情介绍
PCR试剂盒（教学用）
常规PCR发展到如今已经是非常成熟，对于大多数的科研人员来说，买TAQ酶和dNTP就可以，而如果为省事，可以直接买PCR MasterMix。而本试剂盒从PCR的原理来让学生学会PCR。本试剂盒带有模板和引物，可以产生500bp的单一条带。
试剂盒组成：
试剂盒组成 | 50次 | 500次 | 储存条件 |
Taq Polymerase(5U/ul) | 50ul | 500ul | -20℃ |
10×PCR Buffer | 1ml | 5ml | -20℃ |
MgCl2(25mM) | 1ml | 5ml | -20℃ |
模板（1ng/ul） | 100ul | 1ml | -20℃ |
上游引物(10mM) | 100ul | 1ml | -20℃ |
下游引物(10mM) | 100ul | 1ml | -20℃ |
ddH2O（PCR用） | 2ml | 25ml | -20℃ |
6×DNA Lodding Buffer | 1ml | 1ml | -20℃ |
500bp对照（50ng/ul） | 100ul | 1ml | -20℃ |
说明书 | 1份 | 1份 | RT |
保存说明：10×PCR Buffer、MgCl2(25mM)、ddH2O（PCR用）在2-8℃保存一个月对实验无影响，500bp对照、模板和引物在2-8℃保存一周对实验无影响。微量试剂打盖前请离心。
自备试剂：琼脂糖，电泳缓冲液，核酸染料（如EB，goldveiw等）
操作步骤：
按照下面的量加入试剂：可一次配50ul，或者一次配更多的量，如500ul，混匀再分成50ul一管。一般Taq Polymerasezui后加入。
加入试剂 | 加入量总50ul | 加入量500ul |
ddH2O（PCR用） | 37ul | 370ul |
10×PCR Buffer | 5ul | 50ul |
MgCl2(25mM) | 4ul | 40ul |
模板（1ng/ul） | 2ul | 20ul |
上游引物(10mM) | 2ul | 20ul |
下游引物(10mM) | 2ul | 20ul |
Taq Polymerase(5U/ul) | 1ul | 10ul |
总体积 | 50ul | 500ul |
混匀。
按照下面的条件设置反应
温度 | 时间 | 循环次数 |
94℃预变性 | 3min | 1 cycles |
94℃变性 | 30sec | 30 cycles |
54℃退火 | 30sec | |
72℃延伸 | 500-2000bp/1min | |
72℃终延伸 | 5min | 1 cycles |
反应完降温到25℃ | ||
反应完后，取5ul产物，加入1ul 6×DNA Lodding Buffer 混匀电泳检测。可同时在两测跑一个500bp的对照。（1.5%的胶可以得到理想的结果）
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