X-gal溶液 20mg/ml BL546A 现货

IPTG/X-Gal 即用型溶液 产品编号 产品名称 规格 BL545A IPTG 50 mg/ml 5 ml BL546A X-Gal 20 mg/ml 5 ml 产品简介： 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA 的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这 个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏阅读框，但可使少数几个氨基酸插 入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序 列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成 具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操 纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ +细菌在诱导剂IPTG 的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到 质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒 的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产 物转化的钙化菌平板37℃倒置培养12-16hr后，含有插入片段重组质粒的细菌形成白色菌落， 而没有插入片段的质粒细菌形成蓝色菌落。 配制方法： 50mg/ml IPTG 5 ml：取250 mg IPTG，溶于5 ml无菌水中，过滤除菌后-20℃贮存。 20mg/ml X-Gal 5 ml：取100 mg X-gal，溶于5 ml 二甲基甲酰胺（DMF），棕色瓶中-20℃ 贮存。此试剂无需灭菌。 实验程序： 1、转化平板的制备： 向铺好的含有相应抗生素的固体琼脂平板表面加入16 µl的IPTG(50 mg/ml)、40 µl的X-gal (20 mg/ml)，使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开，尽量使溶解X-gal的二甲基甲酰胺挥发 干净。 2、转化 （1）取部分连接产物加到50-100 µl感受态细胞中（感受态细胞应刚从-70℃冰箱取出放 于冰浴上，待刚刚解冻时加入连接产物，连接产物的加入量不超过感受态细胞体积的十分之 一），轻弹混匀，冰浴30分钟。

（2）将离心管置于精确42℃水浴90秒，取出管后立即置于冰浴中放置2-3分钟，其间不 要摇动离心管。 （3）向离心管中加入250-500 µl 37℃预热的SOC或LB(不含抗生素)培养基，150rpm，37℃ 振荡培养45分钟。此步目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 （4）将离心管中的菌液混匀，吸取100 μl加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基 上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后，倒置平板，37℃培养12-16 小时。 3、检测 将得到的白色菌落接种 1-5 ml LB 培养基，37℃摇床振荡培养整夜，保存菌种后提取质 粒，应用 PCR 或酶切方法鉴定插入片段是否正确。 保存条件： -20℃保存，至少一年有效。

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