快速银染试剂盒 BL620A 现货

快速银染试剂盒 产品编号 产品名称 规格 BL620A 快速银染试剂盒 25 T 产品简介： 快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 等蛋白银染的试剂盒。本试剂盒也可以用于 2D 凝胶的银染，并且染色后兼容后续的质 谱检测。本试剂盒只需约 90 分钟内可以完成凝胶的银染。对于 BSA 蛋白，检测灵敏度可以 达到 0.3ng 蛋白。 本试剂盒可足够用于 25 块常规的 8×10cm 凝胶的银染。 说明书后附有实验记录表格，方便记录实验步骤。 产品组份： 产品编号 产品名称 规格 贮存 RTD6401-1 银染增敏液(100×) 26 ml 常温 RTD6401-2 银溶液(100×) 26 ml 常温，避光 RTD6401-3 银染基本显色液(10×) 250 ml 常温 RTD6401-4 银染显色加速液(2000×) 1.5 ml 常温，避光 RTD6401-5 银染终止液(20×) 125 ml 常温 注意事项： 1、由于银染非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常 清洁，使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。 2、需自备乙醇、冰醋酸及 MilliQ 级纯水或双蒸水。 3、下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为 8×10cm 厚度为 0.75-1mm 的凝胶。 对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间 需按照厚度的比例适当延长。 4、本说明书所指的常温温为 20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各 步骤需适当延长时间。 5、银染基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在 30-37℃水浴中溶解， 并充分混匀后使用。 使用方法： 一、固定步骤： 1、电泳结束后，取凝胶放入约 100ml 固定液中，在摇床上室温摇动 20 分钟，摇动速度 为 60-70rpm。固定 40 分钟以上甚至整夜可以进一步降低背景。 固定液的配制： 固定液配制量 无水乙醇 冰醋酸 超纯水 100 ml 50 ml 10 ml 40 ml 2、 30%乙醇洗涤： 弃固定液，加入 100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动 10 分钟，摇动速度为 60-70rpm。 30%乙醇的配制： 70ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇，混匀后即成 100ml 30%乙醇。

3、水漂洗： 弃 30%乙醇，加入 200ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动 10 分钟，摇动速 度为 60-70rpm。 二、增敏步骤： 1、弃水，加入 100ml 银染增敏液(1×)，在摇床上室温摇动 2 分钟，摇动速度为 60-70rpm。 银染增敏液(1×)的配制： 99 ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液(100×)，混匀后即为银染增敏液 (1X)。银染增敏液(1×)配制后需在 2 小时内使用。 2、水漂洗(共 2 次)： 弃原有溶液，加入 200ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动 1 分钟，摇动速 度为 60-70rpm。 重复此步骤一次。 三、银染步骤： 1. 弃水，加入 100ml 银溶液(1×)，在摇床上室温摇动 10 分钟，摇动速度为 60-70rpm。 银溶液(1X)的配制： 99ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液(100X)，混匀后即为银溶液(1X)。银溶 液(1X)配制后需在 2 小时内使用。 2、水洗涤： 弃原有溶液，加入 100ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动 1-1.5 分钟，摇 动速度为 60-70rpm。 注意：水洗涤的时间不能超过 1.5 分钟。 四、显色步骤： 弃水，加入 100ml 银染显色液，在摇床上室温摇动 3-7 分钟，直至出现比较理想的预期 蛋白条带，摇动速度为 60-70rpm。 银染显色液的配制： 银染显色液配制量 银染基本显色液(10×) 超纯水 银染显色加速液(2000X) 100 ml 10 ml 90 ml 0.05 ml 注：银染显色加速液(2000X)有刺激性气味，建议在通风橱内操作；银染显色液配制后 需在 20 分钟内使用。 五、终止步骤： 1、弃银染显色液，加入 100ml 银染终止液(1×)，在摇床上室温摇动 10 分钟，摇动速 度为 60-70rpm。终止时有气体产生属正常现象，产生的气体为二氧化碳。 银染终止液(1×)的配制： 95ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 5ml 银染终止液(20×),混匀后即为银染终止液 (1X)。银染终止液(1X)配制后宜当天使用。 2、水洗涤： 弃银染终止液，加入 100ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动 5 分钟，摇动 速度为 60-70rpm。 六、保存： 可在 MilliQ 级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。 常见问题： 1、 背景太深： （1）显色时间过长。通常显色反应会在 10 分钟内结束，显色反应时间过长会导致背

景很深。 （2）洗涤不充分。洗涤时间过短，或洗涤液加入的量不足，或者容器过于狭小导致摇 动时溶液不易充分混合，或摇动速度过慢，导致混匀不充分。请按照说明书的建议确保各种 溶液的用量和作用时间，摇床的推荐速度为 60-70rpm。 （3）凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。一方面需确保固定的时间和固 定液的用量，另一方面对于不是zui常用的 Bis-Tris 缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分 去除凝胶中的原有缓冲成分，以降低背景。 （4）水的纯度太低。需使用大于 16 MΩ·cm 的高纯度水。 2、 蛋白条带非常浅： （1）蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。半胱氨酸残基的存在 对于银染非常重要，半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。 （2）银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时 间不能超过 1.5 分钟，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。 （3）样量不足。本试剂盒检测 BSA 的灵敏度可以达到 0.3ng，对于不同的蛋白检测灵 敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于 1ng 的蛋白量才能被检测到。 （4）固定步骤后的洗涤不够充分。导致少量乙酸残留，影响后续检测。确保 30%乙醇 洗涤和水洗涤的用量和时间，可以适当延长洗涤时间。 3、凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹： （1）凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液， 同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。 （2）用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水 充分冲洗，zui后用高纯度水再洗涤数次。该容器能于银染，并注意避免各种可能的 蛋白污染。为确保充分洗涤干净，对于耐硝酸的容器，例如玻璃容器，可以在上述洗涤剂及 自来水洗涤后用 50%硝酸洗涤，随后用高纯度水充分洗涤。 （3）指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿 挤压、折叠或摩擦凝胶。 （4）有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。 4、在 60-70 kD 处出现一片模糊的蛋白染色背景： 皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。一方面需注意戴手套操作，另一方面 需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开，甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避 免可能的角蛋白污染。 5、在凝胶的顶端处出现黄色背景： （1）样品中 DTT 浓度很高。采用其它适当的还原试剂，或者在许可范围内适当减少 DTT 的用量。 （2）采用 Tris-Glycine-SDS 电泳体系。Tris-Glycine-SDS 电泳体系中的 Glycine 会 导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。 6、银在染色器皿中出现沉淀： 染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。需确保把染色器皿洗涤干 净。 保存条件： 常温保存，开封后一年有效。

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